JMT日本医疗——使用合成 mRNA 开关和磁珠进行细胞选择的新方法，在短时间内纯化大量靶细胞②

点击量：170   日期：2022-07-26 09:32    编辑：JMT日本医疗

研究背景

心衰是在心肌梗塞和心肌病的背景下发生的疾病，由于心脏的泵血功能下降导致血液循环恶化，目前药物治疗无效的心衰的唯一方法是心脏移植。心衰患者的数量正在稳步增加，并且已经进行了许多替代心脏移植的治疗研究，作为以心衰为中心的心衰的心肌细胞移植治疗。此外，移植诱导从iPS细胞分化的心肌细胞的心肌细胞移植疗法有望实用化。

但临床应用需要100～10亿左右的大量心肌细胞。此外，未分化细胞等非心肌细胞的污染可能导致癌变和意外并发症，还需要高度纯化。通常使用流式细胞仪注 6) 进行细胞选择和纯化。然而，用流式细胞仪收集移植所需的超过 1 亿个细胞是不切实际的，因为它需要每隔几天操作一次设备，而且价格昂贵。此外，由于心肌细胞未鉴定出特异性细胞表面抗原，因此流式细胞仪分选时的纯化率存在问题，并且存在被非心肌细胞污染的风险。

在这项研究中，研究团队着手研究开发miRNA switch MACS方法，作为一种在短时间内以高纯度纯化和回收大量细胞的方法。

研究成果

1) miRNA switch MACS法提取心肌细胞

确认了包括诱导从iPS细胞分化的心肌细胞(以下称为心肌细胞)的细胞群不表达CD4注7)，这是一种细胞表面抗原(图1)。

图1

接着，如图2和图3所示，对心肌中特异性存在的miRNA即miRNA-208a和CD4基因作出反应的miRNA反应OFF开关在其下游整合，导入到含有心肌细胞的细胞群中。同时，还引入了抗菌药物（嘌呤霉素）抗性基因（嘌呤霉素N-乙酰转移酶；PAC）的mRNA。

图2 miRNA switch MACS法提取心肌细胞示意图

图3 MACS法成功提取97%以上的高纯度心肌细胞并给予抗菌剂​

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