JMT日本医疗——阐明遗传性神经性皮肤萎缩症的发病机制，部分髓磷脂蛋白零变异②

点击量：2344   日期：2023-09-28 11:44    编辑：JMT日本医疗

根据开发的纳米髓磷脂法，MPZ的head-to-head-8聚体与膜粘接有关

因此，研究小组开发了评价ECD的膜粘接活性的新实验方法（纳米髓磷脂法）。纳米髓磷脂法是将ECD固定在被称为纳米盘的脂质双层膜的水溶性粒子表面。配制了固定野生型ECD的纳米盘，用电子显微镜观察，通过ECD观测到串珠的纳米盘（纳米髓氨酸）。该结果表明，野生型ECD具有膜粘附活性。接着，他们分别用不同种类的氨基酸替换了被认为在trans相互作用和head-to-head相互作用中发挥重要作用的氨基酸残基，制备了变异型ECD，并进行了同样的实验。结果发现，置换了head-to-head相互作用面的氨基酸残基的W28A变异型ECD不会发生膜粘接，也不会形成纳米髓磷脂。以上结果表明，MPZ通过形成head-to-head-8聚体来粘附膜与膜。

N87H变异型ECD丧失膜粘接活性

然后，将引起CMT的氨基酸残基取代引入ECD中，分析纳米髓磷脂是否形成。于是，发现将存在于对四聚体形成重要的cis相互作用部位的第87个天冬酰胺残基（以一个字表示为N）置换为组氨酸（以一个字表示为H）的N87H变异型ECD不能连接纳米盘，因变异而失去了ECD的膜粘接活性。这可以认为是由于作为侧链小的氨基酸的天冬酰胺被侧链大的组氨酸取代，与相邻的ECD分子的结合变差的缘故。

保持膜粘接活性的两种变异：蛋白质稳定性降低

另一方面，发现导入了CMT相关氨基酸残基取代的D32G变异型ECD（head-to-head相互作用面）和E68V变异型ECD（cis相互作用界面）的ECD形成纳米髓磷脂，保持膜粘接活性。接着，利用圆二色性光谱（CD）分析这些变异型ECD的温度依赖性结构变化，发现变异型ECD在比野生型ECD更低的温度下变性（或凝聚）。由于变异导致的稳定性下降，细胞内难以形成结构正确的蛋白质，或者在细胞表面进行膜粘附的ECD的“保存期”变差，这些都与CMT的发病有关。

今后有必要阐明80个MPZ变异的共同机制

此次研究揭示了3个CMT相关变异对MPZ- ecd产生的功能和结构变化，发现了与CMT发病相关的MPZ上多达80个变异位点。为了开发以MPZ为起点的CMT的治疗药物，有必要弄清这些变异中的许多共同的CMT触发机制。

研究小组表示：“此次开发的纳米髓磷脂方法，在分析多个CMT相关变异对MPZ活性的影响方面，有望成为有用的实验工具。”

日本医疗观光株式会社作为一家专业的赴日医疗服务机构，曾服务过数千名患者赴日求医。和一百多家日本医疗机构有合作关系，虽然由于疫情原因，暂时无法去往日本，但JMT一直在为国内患者做实事，因地制宜开展了远程视频问诊、医疗美容院线产品代购等业务，欢迎大家关注咨询。

日本医疗观光株式会社医疗服务团队在日本治疗最前沿奔走。总部位于东京，致力于整合日本优质医疗资源专心专一专注为您提供日本权威名医定制治疗方案，是拥有日本政府官方颁发的医疗身元担保资质(登录号A-015)的企业。

如果您有日本就医的需要，请拨打免费热线 400-161-8586 热线咨询！

也可直接搜索添加下方微信：JMT1557、tao659872。