JMT日本医疗——通过LRS法研发出简便、高精度的21水解酶缺失症的基因检查方法②

点击量：2745   日期：2023-11-02 10:57    编辑：JMT日本医疗

开发了使用LRS的CYP21A2基因的解析法，与以往法55人110过敏完全一致

近年来，开发了能够一次确定飞跃性长（>10kb）碱基序列的技术LRS法。LRS法从开发之初就被期待为CYP21A2基因的有力分析方法。但是，由于高额的解析费用、设想结构异常的多个PCR组合而成的繁杂的库制作作业、LRS法特有的精度低等原因，未能得到广泛普及。因此，本次研究以开发使用LRS法的简便且可临床应用的廉价CYP21A2解析法为目标。

首先，鉴于CYP21A2基因的病态多态性的种类及其可能性，开发了通过使用1组PCR引物作为靶序列扩增、LRS法分析的文库，大幅减少作业顺序的方法。作为LRS法的分析，使用了以廉价而闻名的牛津纳米拓扑（ONT）公司的MiniON（R）系统（Flongle流动小区，R9.4.1）。通过将PCR产物用于分析来提高读数，解决了可能的低精度。并且，在检体上连接条形码，将1次能够测定的检体数最多增加到24个检体。通过将所开发的方法的可靠性与以往最可靠的方法MLPA法和Nested PCR法相结合的分析方法进行比较来验证，以诊断为21OHD的55人110阿勒尔为对象进行了分析，结果所有结果均一致。另外，新鉴定了至今为止作为21OHD的原因而不为人所知的2个病态多型。

新的Duplex基础呼叫法，同一碱基排列的简单排列进一步提高精度

接着，在使用基于Duplex的呼叫法的ONT公司MiniON（R）系统（Flongle流动小区，R10.4.1）中进行同样的试验，得到了更高精度的结果。特别是在同一碱基排列的简单序列中的变体检测中，与R9.4.1相比，确认了显著的精度的改善。

价格便宜，解析天数也缩短，不需要父母的检体解析

与以往的MLPA法和Nested PCR法相比，每个检体的分析费用也便宜，而且分析所需的天数也从2～3天减少为1天。另外，在以往的MLPA法和Nested PCR法中，为了确定正确的多型，需要与父母的检体一起进行3个检体的分析，但该方法仅通过本人的分析就能够进行多型的确定，如果考虑到这一点，实际费用的抑制会变得更大。

研究小组说，作为这次研究的意义，实现了使用LRS法的高精度、低价格、简便的基因检测技术。并且为今后21OHD基因分析的诊断目的的检测体检测应用开辟了道路。应用本次方法，开发出与21OHD同样伪基因相邻、分析困难的遗传性疾病的廉价且简便的检测方法是可以应用的。

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